最近陈老湿终于完成了一项不可能的任务，那就是阅读了上千篇引用生物膜干涉技术（BLI）的文献，对每篇文献是如何应用生物膜干涉技术的作了总结。为此陈老湿可是耗费了几年的心血啊。

 

如果今天你能坚持把这篇文章啃完，那说明你真的很“饿”，因为你会发现文章里全是“饼”！

BLI文献概述

目前为止，与BLI技术相关的文献一共1800篇左右。近几年的文献增长很快，主要是因为应用BLI技术的科研客户数量在快速增长。

陈老湿阅读了其中的1000篇左右，依据检测的分子类型不同进行了分类，并标记了每种分子类型的文章数。

由此可见，BLI技术的应用非常广泛。除了检测蛋白以及抗体的动力学，在RNA/DNA/多肽/化合物/浓度测定领域也大展身手，此外也涉及到脂质体，纳米材料，病毒以及细菌和细胞等物质的检测。

从数据看，国内用户对BLI应用和国外是完全同步的。尤其在化合物DNARNA纳米材料和多聚物等领域的BLI应用，均是开拓前沿的研究。

 

目前已经有50多个国内用户应用BLI技术发表了文献，其中发表数大于3篇的单位有：

抗体亲和力的BLI文献

应用在抗体方面的BLI文献总结如下：

采取固化抗体与固化抗原检测的BLI文献数量相当。固化抗原所用传感器最多的是SA，其次是NTA、HIS和AR2G传感器；而固化抗体用的最多的是AHC、proA、AMC以及SA。

• 如果抗体是人源或鼠源，一般用AHC或者AMC传感器进行固化检测抗原。可以减少亲合效应(avidity effect)的影响，使得亲和力更准。

• 如果抗体是ScFv、Fab以及纳米抗体，一般固化抗原检测这些抗体。

• 如果要比较不同抗体的亲和力，也可以用固化抗原的方法，减少不同抗体固化水平差异所带来的亲和力检测误差。

• 如果亲和力很强，可以考虑用SA传感器进行固化。

• 考虑到SA传感器的固化是在中性环境中进行，有利于保持抗原活性。

  

抗体配对/Epitope Binning的文献

可见，in-tandem方法用的最多，其次是sandwich方法，premix方法最少。具体方法描述请见《陈老湿聊技术--春风十里，不如你》（可在“往期回顾”中查找）。

• In-tandem方法可以克服抗原多聚物的影响，如抗原是病毒的情况。而且比较容易设置阳性对照，将不加入第一个抗体的第二个抗体信号作为100%信号，进行normalization。

• Sandwich方法适用于直接对表达浓度很低的粗样品进行binning，从而克服In-tandem以及premix对抗体的浓度要求。

• Premix方法可以减少实验步骤，但是需要消耗过量的抗体和抗原，所以相对用的比较少。

 

蛋白-蛋白类文献

在蛋白-蛋白相互作用的BLI文献中，所用的传感器分布如下

SA传感器用的最多，其次是AHC、ProA、NTA等，而氨基偶联相对用的比较少。可能有以下几个原因：

• 很多蛋白在酸性环境中不稳定，而氨基偶联对pH比较敏感，一般需要将固化蛋白溶解在酸性pH中进行固化。而生物素化和生物素固化都在中性pH中进行，比较容易维持蛋白活性。

• 如果蛋白带有融合标签，可以用特异性的传感器进行固化，但是考虑到很多实验室的蛋白是用同一个载体表达的，固化蛋白和分析蛋白都是带有同一标签，为了克服分析蛋白与传感器结合带来的影响，一般还是用SA传感器进行固化。

 

DNA/RNA文献

DNA、RNA在BLI文献中，大多数做法都是用SA固化DNA/RNA，检测蛋白或者其他物质。如下图

• DNA/RNA的生物素化非常方便，<200bp的DNA/RNA可以直接用合成方法，而比较长的DNA/RNA可以通过PCR来实现生物素化。

• DNA/RNA固化的传感器比较容易再生。

多肽文献

而多肽和蛋白的BLI文献中，多数是用SA传感器固化生物素化多肽检测蛋白，其次是用SSA传感器固化蛋白检测多肽。

• 多肽一般可以在合成的时候带上生物素，并且带上比较长的linker，从而克服空间位阻。而较大的多肽，比如20个氨基酸以上，可以考虑直接偶联。

• 如果多肽作为分析物，参考小分子的做法，需要获得较高的蛋白密度，因此一般用SSA或者NTA传感器。

 

多糖文献

在多糖与蛋白的相互作用中，用的最多的是在SA传感器上固化生物素化的多糖，并检测蛋白。

• 多糖的固化可以有两种方式，一种是将多糖固化在载体蛋白上，比如BSA，再用APS传感器进行固化。

• 如果有的多糖带有氨基或者羧基，可以考虑生物素化。

 

小分子化合物检测文献

在小分子化合物的检测中，主要手段是用SSA固化蛋白检测化合物，也有少量的是固化化合物。

• 一般用SSA传感器可以获得比较好的蛋白密度用于检测信号比较小的小分子。

• 如果NTA传感器可以获得很高的信号，有时候也可以用来检测小分子。

• 小分子的固化比较困难，一般是合成的时候带上生物素，但是需要保证很长的linker以克服空间位阻效应，还要保证带上生物素后不会对小分子活性产生影响。

 

浓度测定文献

在和浓度检测相关的BLI文献中，多数是用proA/proG/proL对IgG进行定量，也有对特定蛋白和化合物进行定量。

• 通过现有的proA/G/L等传感器可以直接对粗样品中的IgG以及GST/HIS融合蛋白进行快速定量。

• 如果有一个结合很强的抗体，也可以对一些特定的蛋白或者细菌进行快速定量。BLI技术能够快速建立方法，一般几天就能完成，10分钟完成一轮检测。

• 小分子一般用竞争法进行检测。一般将小分子或者小分子偶联蛋白固化在传感器上，检测含有小分子的样品和抗体混合样品。

 

涉及病毒，纳米材料，脂质体和多聚物等物质分类比较繁杂，所以暂不进行统计。